を販売した会社はほぼすべてあります。ブロメライン酵素粉末ブロメラインをパパインと混合します。ブロメラインを 5000GDU/g まで精製するのは困難です。 しかし、パパインを1000,000GDU/gまで精製するのは非常に簡単です。 2000,000GDU/g まで。 しかし、ブロメラインの機能はパパインとは異なります。 偽物と本物の色、匂い、水溶性、味のコントラスト。 違いは、右側のブロメライン酵素粉末は灰色で、無臭、無味、そして水に不溶性です。
しかし、偽ブロメラインには次のような特徴があります。
●淡黄色で芳香があり穏やかな甘みがあり、水溶性です。 それがパパインの特徴です。
●炎症を抑え、痛みを和らげる目的で使用されます。 しかし、パパインにはこれらの機能はほとんどありません。
● 食品添加物ではなく、栄養補助食品としてのみ使用されていますが、確かに医薬品グレードである可能性があります。 しかし、パパインは肉を柔らかくする粉末と化粧品としてのみ使用されます。
SDS-PAGE ゲルおよびゼラチン分解ユニット分析および HPLC 法に従ってブロメラインをテストしました。偽造品の場合、SDS-PAGE ゲル法では標的分子が少なくなります。
以下はSDSページの電気泳動結果です。
上の斑点は、正しい製品のみが写真の正しい場所に同じ斑点があることを示していますが、偽物の製品には斑点がほとんどなく、分子量がほとんど見えないことを意味します。
ブロメラインの分子量は約 33000 ですが、パパインの分子量は 21000 です。 HPLC クロマトグラム:
適切な抽出物のみに適切な分子量のブロメラインが含まれており、HPLC で検出できることがわかります。
ただし、ゼラチン消化装置分析法 (GDU) のみによってテストした場合は、付録 II を参照してください。 正しい製品と偽の製品の両方で、以下と同じ結果が得られます。
パイナップルの茎は非常に安価で、茎からブロメラインになる割合は非常に低く、製造過程で汚染が発生します。
ブロメライン酵素粉末工場のほとんどは近くにあります。 新鮮な茎を使用しています。 ステムを遠方へ発送することは不可能です。 原料は畑から採取したらできるだけ早く取り扱うか、タンパク質の分解を避けるために低温環境（4-8度）で保管する必要があります。 実際には、メーカーは茎付きパイナップルが多すぎるため、上記 2 つの条件のいずれも満たすことができません。 合理的な方法は、処理時間とタンパク質活性の損失とのバランスをとることです。 通常、パイナップルの収穫時期に粗原料を製造し、低温環境（4-8度）で保管します。
私たちは SDS ページの電気泳動に関するテストを行っています。理論的には、それを 10、000、または 20、000 まで上げることができます。しかし、非常に高価になります。 5000GDU/g で、おそらくマルト担体/マイクロカプセル化されたものまたは何かに有機グレードの抽出/精製を加えて安定させます。
附属書I
●方法5 SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)
SDS-PAGE は、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動法です。 この方法におけるタンパク質分離の原理は、ほとんどのタンパク質がアニオン性界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム (SDS) と重量比で結合して複合体を形成できるという事実に基づいています。
タンパク質分子が運ぶ負の電荷は、天然のタンパク質分子の正味電荷をはるかに超えており、さまざまなタンパク質分子の電荷効果を排除し、タンパク質を分子サイズに応じて分離します。
この方法は、タンパク質の定性的同定、純度および不純物の管理、定量測定に使用されます。
1 計装装置
定電圧または定電流電源、縦型平板電気泳動槽、接着剤作製用モールド。
2. 試薬
(1) 水。
(2) 分離ゲル緩衝液 (4x、溶液 A) 1.5mol/L トリヒドロキシメチルアミノメタン塩酸緩衝液。 トリヒドロキシメチルアミノメタン 18.15g を量り、適量の水で溶かします。 塩酸でpH値を88に調整し、水で100mlに希釈します。
(3) アクリルアミド 58.0g と N,N'-メチレンビスアクリルアミド 20g を秤量し、30% アクリルアミド溶液 (B 液) に溶かし、温水に溶かして 200ml に希釈し、ろ紙でろ過する（保存容器に保管）暗い）。
(4) ドデシル硫酸ナトリウム 10% SDS 溶液（C 溶液） 10g を秤量し、水に溶かして 100ml に希釈する。
（５）テトラメチルエチレンジアミン溶液（ＴＥＭＥＤ、Ｄ溶液）の製品化試薬。
10％過硫酸アンモニウム溶液（E液） 過硫酸アンモニウム10gを量り、水に溶かして100mlに希釈します。 使用前に準備するか、別途-20度で2週間保管することをお勧めします。
(7) 濃縮ゴム緩衝液（4×、F 溶液）0.5mol/L トリヒドロキシメチルアミノメタン塩酸緩衝液、トリヒドロキシメチルアミノメタン 6.05g を量り、適量の水を加えて溶解し、塩酸で pH 6.8 に調整する。酸性で、水で100mlに希釈します。
(8) 電極緩衝液（10×） トリメチルアミノメタン 30g、グリシン 144g、ドデシル硫酸ナトリウム 10g を秤量し、水に溶かして約 800ml に希釈する。 塩酸でpH8.1-8.8に調整し、水で1000mlに希釈する。
(9) 非還元サンプルバッファー (4 ×) トリメチルアミノメタン 303g、ブロモフェノールブルー 20mg、ドデシル硫酸ナトリウム 8.0g を秤量し、グリセリン 40ml を量り、水に溶かして約 80ml に希釈する。 塩酸でpH68に調整し、水で100mlに希釈する。
(8) 電極緩衝液（10×） トリメチルアミノメタン 30g、グリシン 144g、ドデシル硫酸ナトリウム 10g を秤量し、水に溶かして約 800ml に希釈する。 塩酸でDH値を81-88に調整し、水で1000mlに希釈する
(9) 非還元サンプル緩衝液（4×） トリメチルアミノメタン 3.03g、ブロモフェノールブルー 20mg、ドデシル硫酸ナトリウム 80g を量り、グリセリン 40ml を量り、水に溶かして約 80ml に希釈する。 塩酸でpH6.8に調整し、水で100mlに希釈する。
(10) 還元被験物質緩衝液（4×） トリメチルアミノメタン 3.03g、ブロモフェノールブルー 20mg、ドデシル硫酸ナトリウム 80g を量り、グリセリン 40ml を量り、水で約 80ml に溶解し、加えます。 - 20ml メルカプトエタノールを塩酸で pH 6.8 に調整し、水で 100ml に希釈します（またはトリメチルアミノメタン 3.03g、ブロモフェノール ブルー 20mg、ドデシル硫酸ナトリウム 8.0g、グリセロール 40ml を量り、水に溶かして希釈します） 80ml に調製し、塩酸で pH 6.8 に調整し、水で 100ml に希釈し、使用前にジチオスレイトールを 100mmol/L に加えます。
● 附属書 II
ゼラチン消化ユニット分析法 (GDU)
A. 目的: この手順は、ブロメライン酵素粉末のタンパク質分解活性を測定するために使用されます。
B. 設備:
1. pH計
2. 45.0度±0.1度の恒温水槽
3. 分析天びん
4. メスフラスコ
5. メスピペット
6.タイマー
7. デジタルビュレット (精度 0.1 ml)
8. 換気フード
9. 自動ピペッター
C. 安全上の注意事項:
このテストはドラフト内で実行する必要があります。
1. 標準的な実験室の安全慣行を利用します。
2. ホルムアルデヒド: 常にドラフト内に準備して保管してください。 発がん性物質および催奇形性物質として知られています。
3. 過酸化物：強力な酸化剤
D. 試薬および試薬の調製:
1. 蒸留水: 約 500 ml: 0.1 N HCl で pH 4.5 に調整します。
2. ゼラチン基質:
ａ． 25グラムのゼラチン（Mikrobiologie. 1.04070）を375 mlの熱湯に溶かし、沸騰させます。 45度まで冷まします。
b. 0.1 N HClでpHを4.5に調整し、pH 4.5の蒸留水500 mlに希釈します。
c. ゼラチン基質を45度に保ちます。
3. 緩衝液:
ａ． 15 gm NaCl を 150 ml ビーカー内の 40-50 ml 水にゆっくりと加え、かき混ぜて溶解します。
b. 0.570 mlの酢酸を加えます。
c. 0.2N HCL で pH を 4.5 に調整します (容量は 100ml を超えます)。
4. 3% 過酸化水素:
ａ． 2.5 ml の 30 パーセント過酸化水素 (原液) をピペットで 25 ml メスフラスコに入れ、pH 4.5 の蒸留水で所定の容量まで希釈します。
5. 37 パーセントのホルムアルデヒド、pH 9。0: a. 十分な量（100 ml）のホルムアルデヒドを 0.1 N NaOH で pH 9.0 に調整します（pH 調整前にサンプルあたり約 20 ml のホルムアルデヒド）。
ゼラチン消化ユニット分析法 (GDU) - 続き
6. 0.100 N NaOH: (標準化されたものを購入) 原液：0.100Nで標準化
E. 手順:
1. 酵素の準備:
ａ． 酵素調製物の計算
体重 {{0}}/目標活動量 (約 0.05 g または 50 mg)
A. 酵素を正確に量り、50 ml メスフラスコに入れます。
B. 8.3 mlの緩衝液を加えます。
b. 室温で30分間放置します。
C. pH 4.5 の蒸留水を使用して 50 ml に希釈し、小さな撹拌子を加え、さらに 10 ～ 15 分間撹拌します。
2. 酵素の手順:
ａ． ゼラチン基質 25 ml を、撹拌棒の入った 2 つの 100 ml ビーカーのそれぞれにピペットで移し、45 度の水浴に 5 分間置きます。1 つは試験溶液用、もう 1 つはブランク溶液用です。
b. テストソリューション:
1) ブロメライン酵素粉末溶液 1.0 ml を試験溶液用に指定されたビーカーに加え、タイミングを開始し、旋回させます。
2) 45 度で正確に 20 分間インキュベートした後、0.1 ml の 3% 過酸化水素を加えてかき混ぜます。
3) さらに 5 分間インキュベートします。
4) ビーカーを水浴から取り出し、絶えず撹拌しながら pH プローブを挿入します。
5) 10 秒後の pH を記録します (初期 pH)。
6) 0.1 N NaOH で pH 6.0 に調整します。 (約 2-4 ml)
*注: pH を 6 に調整する場合。0 pH 5.8 には注意してください。 pH はゆっくりと上昇し、この時点で NaOH を微量添加すると pH が大幅に上昇します。
７）一定の撹拌を続けながら、１｛｝｝ｍｌの３７パーセントホルムアルデヒド、ｐＨ９．０を添加する。
８）１０秒後および１分後のｐＨを記録する。
9) 0.1 N NaOH で pH 9.0 まで滴定します。
10) 滴定量を記録します。
これが検査力価 T.c です。
空のソリューション: 空のソリューションは、テスト ソリューションと同時に実行する必要があります。 これは、試験溶液の開始から 12 分後にブランク溶液の測定を開始することによって達成されます。 これにより、ブランク溶液に進む前に、テスト溶液でのアッセイを完了する時間が得られます。 1) 0.1 ml の 3 パーセント過酸化水素をブランク溶液用に指定されたビーカーに加え、かき混ぜます。
2) 45 度で正確に 20 分間インキュベートした後、1.0 ml のブロメライン溶液を加えてかき混ぜます。
3) さらに 5 分間インキュベートします。
ゼラチン消化ユニット分析法 (GDU) - 続き
4) ビーカーを水浴から取り出し、絶えず撹拌しながら pH プローブを挿入します。
5) 10 秒後の pH を記録します (初期 pH)。
6) 0.1 N NaOH で pH 6.0 に調整します。 (約 2-4 ml)*上記の注意を参照してください。
７）一定の撹拌を続けながら、１｛｝｝ｍｌの３７パーセントホルムアルデヒド、ｐＨ９．０を添加する。
８）１０秒後および１分後のｐＨを記録する。
9) 0.1 N NaOH で pH 9.0 まで滴定します。
10) 滴定量を記録します。 これがブランク滴定値 B です。
F. 計算:
1. 定義: 1 ゼラチン消化単位は、45 度で 20 分間消化した後、pH 4.5 または pH 5.5 (GDU pH 4.5 または pH 5.5) の標準ゼラチン溶液から 1 mg のアミノ窒素を遊離する酵素の量です。
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 重量 (g) ここで: T=試験力価 (ml 0.1 N NaOH) B=ブランク滴定 (ml 0.1 N NaOH) N=標準化された NaOH の規定度 (すなわち 0.100) 重量 (g)=酵素の初期重量
G. テストパラメータ:
1. 酵素製剤は約 0.001 g/ml (1 mg/ml) の濃度に、またはブロメライン酵素粉末濃縮物の場合は約 1-2 GDU/ml の濃度に希釈されます。 メソッドの精度を確保するために、実行ごとに標準物質が分析されます。
Guanjie は、GDU 試験法を使用してバルクのブロメライン粉末を提供しています。当社の生産プロセスは、2 つの工場と 2 つの独立した研究所にまたがる 3 つの生産ラインを活用し、CGMP 標準ワークショップの下で稼働しています。 商品に関するお問合わせは、 をお伝えください。info@gybiotech.com.
